Page 80 - 畜牧兽医与现代农业技术研究

Research on Animal Husbandry and Veterinary Medicine and Modern Agricultural Technology
畜牧兽医与现代农业技术研究

Ct 值（qPCR 技术）不能达到较好分辨效果的不足。在动物疫病检测中，可以用
与 qPCR 相同的反应混合物和循环条件设计 dPCR 方案，使结果更准确，从而可
以进行更精确的诊断。
1.dPCR 在细菌性动物疫病检测的应用
梅力等建立的布鲁菌微滴数字 PCR 检测方法，最低检测下限可达 1.12 拷

贝 /μL，可对布鲁菌感染的临床样品进行定量检测。田国忠等建立了布鲁菌微滴
数字 PCR 方法，布鲁菌核酸 DNA 为 3.68fg/ 反应时，ddPCR 检出靶标基因拷贝
数可达 1 拷贝 / 反应，可检测微量核酸 DNA。Song 等利用 ddPCR 检测结核分枝
杆菌特异性基因（M.tb-specific CFP10），对于 ddPCR，CFP10 的检测限为 1.2

拷贝 /μL，而 qPCR 为 15.8 拷贝 /μL。王建峰等针对幼虫芽孢杆菌 16SrRNA 基因
建立幼虫芽孢杆菌微滴式数字 PCR 检测方法，检测灵敏度可达 2.9 拷贝 /μL。
2.dPCR 在病毒性动物疫病检测的应用

Zhao 等利用 ddPCR 检测法分别对副痘病毒属（PAPV）目前已知所有病毒，
如羊口疮病毒（ORFV）、伪牛痘病毒（PCPV）和牛丘疹性口炎病毒（BPSV）等
进行了检测。Benjamin 等首次应用 ddPCR 技术在高通量样品条件下对二代测序技
术进行验证。Boettger 等首次证明了 ddPCR 试验结论与 NGS 结论高度吻合。邬旭

龙等建立的非洲猪瘟病毒 ddPCR 方法，ddPCR 的最低检测限度可达到 0.36 拷贝，
灵敏度是 qPCR 的 10 倍。兰德松等研究建立的 ddPCR 方法对 PRVgD、gE 基因的
敏感性比相应的 qPCR 方法高 10 倍。董桂伟建立了禽腺病毒检测方法，qPCR 检
出质粒标准品的最低浓度为 100 拷贝 /μL，而 ddPCR 方法为 10 拷贝 /μL。

3.dPCR 在寄生虫病检测的应用
目前对于低丰度目标序列的检测，定量 PCR、杂交等方法都因受到背景
DNA 的干扰，使得检测灵敏度及精确性都达不到精确定量的要求。与相同生物
材料上进行的 qPCR 相比，dPCR 显示出高灵敏度的检测，尤其是在含有 PCR 扩

增抑制剂的样品中，如对粪便中隐孢子虫的定量分析。dPCR 在要求高精度进行
定量检测的诊断中是一种较有效的方法，例如临床样品中的寄生虫负荷，以及患
者之间或在不同时间点采集的样品中寄生虫的统计比较。在血吸虫病检测中，某
种程度上 dPCR 结果能够更早和特异性检测到日本血吸虫。据报道，dPCR 检测

法是检测和定量核酸小片段（例如 cfDNA 和 micro-RNA）的新方法，是一个有
希望的潜在诊断应用，尤其是在针对血吸虫病消除的国家和地区。Yu 等建立羊

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