Page 81 - 畜牧兽医与现代农业技术研究

第二章 动物防疫检疫

鞭虫病的早期诊断检测方法，对于重组质粒，qPCR 结果显示每个反应的检测限
为 31.7 拷贝，而 ddPCR 能够检测到每个反应低于 3.17 拷贝的浓度。
4.dPCR 在动物疫病检测其他方面的应用
在标准物质研制领域，生物标准物质的研制逐渐成为研究热点，同时基于核

酸检测技术的开发与应用推动了核酸标准物质的进程。核酸标准物质即为用于核
酸扩增技术的标准物质，是生物标准物质的一种。核酸标准物质在医疗诊断、转
基因检测、生物安全等方面有着极大的发展空间。标准物质具有通用属性，可以
用于定性检测，也可以用于定量检测。核酸标准物质需要高级别精准的定值方法，

数字 PCR 作为单分子定量技术得到了广泛的应用。与 qPCR 不同，dPCR 不需要
依赖分析样品和参考标准品间的标准曲线进行绝对定量分析，并可用于 qPCR 测
定参考标准品绝对定量。国内已有研究通过数字 PCR 法制备出了猪繁殖与呼吸
综合征病毒、猪瘟病毒、猪塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒等国家二级标准物质。采

用高精确度的数字 PCR 技术替代荧光定量 PCR 技术进行定值，充分保障了定值
结果的可靠性和技术权威性。此外，dPCR 被越来越多地用于定量分析包括单核
苷酸多态性（SNP）在内的序列变异，用于检测稀有基因序列，分析药物敏感性
和进行人畜共患病筛查。

（三）存在的问题及发展趋势
目前，数字 PCR 技术依靠其绝对定量的技术优势已经在各个领域崭露头角，
但是也面临一些挑战。多路荧光通道方法依赖特定的平台，dPCR 平台以及扩增
混合物试剂的选择可能会受到限制，具体取决于可用的商用仪器。尽管 dPCR 优

于 qPCR，但它不可能在临床实验室中完全取代 qPCR。一些研究表明，在高核
酸浓度下 dPCR 可能变得饱和，因此其性能比 qPCR 差，这强调了适当稀释的重
要性。多重 PCR 是在一个样本中可以获得各种信息的方式，可充分利用极少量
的和难以获得的生物样品，尤其是临床样本，减少病例的痛苦及经济负担。目前，

伯乐 QX200 检测通道可覆盖双通道（FAM/HEX），新推出的 QXONE 系统配备
4 个独立的荧光检测通道检测；BioMark HD 选配 IFC 微液流芯片（耗材）-Digital
Array 最多能兼容 4 种荧光染料进行多通道 PCR；Quant Studio 3D 系统支持多色
荧光系统（FAM/VIC）；Naica 数字 PCR 系统已经在多重方面使用了三通道技术；

关于更多通道的需求各大厂商也在继续研发中。
目前，另外一个弱势是新技术使用的接受度，成熟方法以 qPCR 为主，传

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