Page 136 - 临床护理常规及专科护理技术

临床护理常规及专科护理技术
Clinical Nursing Routine and Specialized Nursing Technology

（一）ZFNs 技术
1985 年，Miller 等首次在非洲爪蟾（Xenopus laevis）的转录因子（transcription
factor IIIA，TFIIIA） 中 发 现 了 具 有 锌 指 结 构 的 蛋 白（Zinc—finger protein，

ZFP）。锌指结构是由多个 Cys 和 His 残基通过 zn 螯合而成的蛋白质结构，能够
与相应的 DNA 序列三联体碱基发生特异性的结合。ZFN 技术是将锌指蛋白（ZFP）
与 FokI 核酸内切酶融合而成，其 N 末端为锌指蛋白 DNA 结合域，c 末端为非特
异性核酸酶 FokI 剪切结构域。其中，ZFP 就是利用锌指结构的上述特点，识别

并结合特异 DNA 序列，FokI 则通过二聚体在靶序列附近产生 DNA 的 DSBs。从
而诱导细胞内的修复机制，即同源重组修复（HDR）或非同源末端连接（NHEJ），
最终实现基因组的靶向敲除（knock.out）或敲人（knock.in）。
（二）TALENs 技术
TALENs 核酸酶由两部分组成：TALE 蛋白和核酸内切酶 FokI。TALE

来自植物黄单胞菌（Xanthomonas）， 含 3 个结构域：N 端含有转运信号
（translocationsigna1）、C 端含有核定位信号（nuclear localization signal，NLS）
的转录激活结构域（activation domain，AD）及中部负责识别并结合 DNA 序列。

其中，TALE 结构域的 N 端是一个易位结构域（translocation domain，TD），能
够分泌信号；中间的 DNA 结合结构域（DNA-binding domain）为中心重复区，
由 12~30 个重复单元组成，每个重复单元一般含有 34 个氨基酸残基，其中第
12、13 位氨基酸高度可变，特异性识别 DNA 碱基，被称为重复可变的双氨基酸

残基（repeat-variable diresidue，RVD）。RVD 序列决定了 TALE 蛋白的识别特异性，
不同的 RVD 能够分别对应识别 A、T、G、C 碱基中的一种或多种。在应用过程
中最常见的 4 种 RVD 分别为 HD（His-Asp）、NG（Asn-Gly）、NI（Asn-Ile）、
NN（Asn.Asn），其中 HD 识别 0C，NG 识别 0T，NI 识别 A，NN 识别 G 或 A。

进一步研究发现，NH（Ash.His）作为一种新的 RVD 亦可高特异性识别碱基。C
端含有核定位信号及转录激活因子，帮助 TALE 蛋白从细胞质进入细胞核并发挥
转录激活作用。当 FokI 二聚体对 DNA 双链进行切割时，会引发 NHEJ 或 HR 修
复机制，利用该机制可以达到基因编辑的效果。

（三）CRISPR/Cas 技术
CRISPR/Cas 系统是一种由 RNA 介导的，存在于约 40% 的细菌和 90% 的古
细菌中，主要为抵抗噬菌体或质粒所带来外源 DNA 片段入侵的免疫系统 203。

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