Page 99 - 低碳环境下的监测与保护

第五章 环境检测技术研究

测。其原理是通过标记已知序列的核酸单链与互补序列的核酸单链，按碱基配对

原则形成杂交分子链，根据是否产生杂交信号及信号多少来判断食品样品中是否
存在目标菌，并对其进行定性和定量分析。
2.PCR 检测技术的应用
PCR 检测技术是在体外特定条件下，以 DNA 为模板，特定基因的核酸序列

依次经过高温变性、低温退火、适温延伸 3 个环节进行复制扩增，周而复始循环
复制，从而放大扩增目标基因片段。PCR 检测技术在应用初期，主要被应用于转
基因以及基因克隆等技术领域。随着该技术的不断发展成熟，目前在食品检验工

作中也将其用于微生物检测。在食品检验工作中，通过核酸分子杂交、基因探针
以及核酸探针技术的综合应用，可以有效检测辨别食品的基因链特征，且该技术
具有很高的敏感性。
3. 基于 PCR 的衍生检测技术应用

以 PCR 为基础改进、发展了一系列衍生检测技术，主要包括多重 PCR 技术、
荧光定量 PCR 技术、数字 PCR 技术等。多重 PCR 技术是一种 DNA 扩增技术，
同一个反应体系中在 PCR 单对引物的基础上增加引物对数，从而扩增多个目的

基因，以达到同时检测多种致病菌、缩短检测时间的目的。荧光定量 PCR 技术
是在反应体系中加入荧光染料或荧光探针，监测荧光信号的强弱，通过标准曲线
分析检测目标菌。该方法灵敏度高、特异性好，是检测致病菌的重要技术手段。

4. 核酸等温扩增检测技术的应用
不同于 PCR 检测技术，核酸等温扩增技术在实际操作和仪器要求方面更为
简单方便。核酸等温扩增检测技术包括依赖环介导等温扩增、依赖核酸序列等

温扩增、交叉引物等温扩增、滚环等温扩增等，其中环介导等温扩增检测技术
（LAMP）在致病菌检测中应用较为广泛。与传统 PCR 检测技术比较，该技术
对退火和延伸的 2 个不同温度的反应进行优化，在 LAMP 中表现为在同一温度
下不断进行扩增，历时较短，操作简便，通过肉眼观察反应物产生白色沉淀的浊

度，即可判断是否有扩增。
5. 生物芯片检测技术的应用
生物芯片检测技术主要是以分子之间的相互特异性作用为基础，通过缩微技

术以及电子技术，来促使大量生物大分子在固相支持物表面（如玻璃芯片、硅芯
片等）集成固化，使其形成二维分子的密集排列形式，然后再通过检测设备对其

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