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生态环境监测技术应用
pplication of Ecological Environment Monitoring Technology

它存在着分离过程复杂，培养时间长（3~5d），特异性培养基价格昂贵等问题。
（二）血清抗体检测
血清抗体检测常被用作军团菌疾病流行病学回顾性调查时的检测方法。常用

间接免疫荧光法（IDFA）检测感染病人血清中军团菌抗体 IgM，具有简便快速
之优点，但敏感性较低，且抗军团菌抗体达到诊断水平（双份血清效价 4 培增长，
单价血清效价 128）需较长时间，不利于早期诊断，另一个问题是交叉反应，还
有部分健康人群有嗜肺军团菌 1 型抗体水平升高。

（三）尿抗原检测
这是一种廉价、快速的检测方法敏感性和特异性均较好，但其只能检出嗜肺
军团菌Ⅰ型，由于军团菌约有 80%~85% 油肺军团菌Ⅰ型引起，且尿标本采样方
便而成为临床的一种常用检测方法。

（四）分子生物学检测方法
1.PCR 基因诊断技术
针对军团菌属的引物有 16SrRNA 基因引物和 5SrRNA 基因引物，针对军团
菌种的引物有mip基因引物，其基因表达产物为24KD的mip蛋白，具有种特异性。

迄今为止，PCR 技术已发展得比较完善，当前国内外有常规 PCR、套式 PCR、
半套式 PCR、多重 PCR 等。从特异性、灵敏性、可操作性、经济性等方面比较，
半套式 PCR 特别适用于环境样本的检测，普通 PCR 的假阳性问题在半套式 PCR
中可被指示出来，重复性稳定性都很好。多重 PCR（MultiplexPCR）是标准 PCR

的发展和完善，在微生物的检测中，可同时应用多对引物扩增微生物核酸的不同
片段，以提高检测的灵敏度和特异性，减少假阳性和假阴性的发生，而且多重
PCR 更优于同时扩增的普通 PCR，因为它不但能从其他细菌中指示出某一个特
殊的细菌，而且能区别出同一属的种。因此多重 PCR 能成为早期诊断、病原学

分类鉴定、流行病学调查分析、传染源追踪于一体的检测方法，且省时、省力、
灵敏度高、特异性强。但用 PCR 技术诊断军团菌还没有达到令人满意的效果。
因为每套引物往往只能针对一种或几种军团菌，而军团菌的种类有很多，而且新
种型不断被发现，即使用上所有的引物也不能检测出所有种类的军团菌。

2.PCR- 探针法
应用 PCR 反应扩增军团菌的特异性靶序列，并结合使用基因探针杂交检测
扩增产物，可提高敏感性和特异性，能检测出 fg 水平的核酸。用限制性内切酶

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