Page 171 - 大樱桃优质高产栽培与病虫害防治

第四章 大樱桃病虫害防治技术手段

第四章 大樱桃病虫害防治技术手段

第一节 大樱桃灰霉病防治药剂筛选与应用

一、樱桃灰霉病菌 LFD-RPA 快速检测方法

灰霉病是樱桃的主要病害之一，由半知菌类灰葡萄孢侵染所致，可为害樱桃

的花、叶、果实等多个部位。灰葡萄孢在温湿度适宜时可萌发形成大量的分生孢
子，可在一个生长季重复进行多次再侵染，从而导致病情极易扩展传播，加重危
害，并且在果实运输或贮藏过程中，由于机械摩擦造成伤口或温湿度及密闭条件

控制不当，极易促使病原菌再次繁殖与扩散，造成更大危害。病菌以菌丝、分生
孢子梗随发病组织在土壤中越冬。该病害在中国的发生普遍且发病率逐年上升，
对中国樱桃产业的发展构成极大威胁。因此，建立一套准确灵敏的樱桃灰霉病菌
的快速检测方法，用于病菌的快速检测与病害的早期诊断，对于及时防控病原菌
的流行与传播具有重要意义。

传统的真菌监测技术需要对病原菌进行分离培养，根据病原菌菌落的大小、
形状、生物学特性等进行鉴定，耗时耗力，病害诊断需要积累丰富的实践经验，
且一些病原真菌的外部形态特征十分复杂，既具相似性，又存在不稳定性，使检

测难度大大增加。目前常规 PCR、巢式 PCR、LAMP 和实时荧光定量 PCR 等分
子技术已广泛应用于灰葡萄孢的检测。巢式 PCR 极大提高了检测的特异性与灵
敏度，但检测时间长，操作复杂。PCR 可对检测结果准确定量，可操作性强，但
成本相对较高。LAMP 具有特异性高、操作简单、检测速度快等特点，但引物设

计复杂，且易出现假阳性。2006 年 Piepenburg 创建重组酶聚合酶扩增（RPA）技术，
利用重组酶与引物结合形成蛋白 -DNA 复合物在双链 DNA 中寻找并定位同源序
列，从而实现对模板上目标区域的指数扩增。侧流层析试纸条（LFD）样品端携
带有纳米金粒颗粒，检测线含有生物素抗体。利用生物素标记的引物和羧基荧光

素（FAM）标记的探针对目的基因扩增后，将试纸条样品端浸入扩增液，在检测
线上会形成生物素抗体 - 核酸 - 纳米金粒复合体而呈现暗红色条带。RPA 方法引

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