Page 277 - 新编动物防疫检疫手册

制备的样本在 2 ～ 8℃条件下保存应不超过 24h，若需长期保存应置 -70℃以
下，但应避免反复冻融（冻融不超过 3 次）。

3 操作方法

3.1 实验室标准化设置与管理
禽流感病毒通用荧光 RT － PCR 检测的实验室规范。

3.2 样本的处理

在样本制备区进行。

⑴ 取 n 个灭菌的 1.5mL Eppendorf 管，其中 n 为被检样品、阳性对照与阴性对

照的和（阳性对照、阴性对照在试剂盒中已标出），编号。
⑵ 每管加入 600μL 裂解液，分别加入被检样本、阴性对照、阳性对照各

200μL，一份样本换用一个吸头，再加入 200μL 氯仿，混匀器上振荡混匀 5s（不

能过于强烈，以免产生乳化层，也可以用手颠倒混匀）。于 4℃、12000r/min 离心
15min。

⑶ 取与⑴相同数量灭菌的 1.5mL Eppendorf 管，加入 500μL 异丙醇（-20℃

预冷），做标记。吸取本标准⑵各管中的上清液转移至相应的管中，上清液应至

少吸取 500μL，不能吸出中间层，颠倒混匀。

⑷ 于 4℃、12 000r/min 离心 15 min（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向
放置），小心倒去上清，倒置于吸水纸上，沾干液体（不同样品须在吸水纸不同

地方沾干）；加入 600 μL 75％乙醇，颠倒洗涤。

⑸ 于 4 ℃、12000 r/min 离心 10min（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向
放置），小心倒去上清，倒置于吸水纸上，尽量沾干液体（不同样品须在吸水纸

不同地方沾干）。

⑹ 4000 r/min 离心 10s（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），将

管壁上的残余液体甩到管底部，小心倒去上清，用微量加样器将其吸干，一份样

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