Page 448 - 新编动物防疫检疫手册

2.4.2.3 全血样品处理
待血凝后取上清放于离心管中，4℃ 8000 g 离心 5 分钟，取上清 100µL，加

入 500µL 消化液和 10µL 蛋白酶 K 溶液，混匀后，置 55℃水浴中过夜。

2.4.2.4 阳性对照处理
取培养的炭疽杆菌，重悬于生理盐水中。取其悬液 100µL，置 1.5 mL 灭菌离

心管中，加入 500µL 消化液和 10µL 蛋白酶 K 溶液，混匀后，置 55℃水浴中过夜。

2.4.2.5 阴性对照处理

取灭菌双蒸水 100µL，置 1.5 mL 灭菌离心管中，加入 500µL 消化液 10µl

蛋白酶 K 溶液，混匀后，置 55℃水浴中过夜。
2.5 DNA 模板的提取

2.5.1 取出已处理的样品及阴、阳对照，加入 600µL 酚 / 氯仿 / 异戊醇混合液，

用力颠倒 10 次混匀，12000g 离心 10 分钟。
2.5.2 取上清置 1.5mL 灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，置液氮中 3

分钟。取出样品管，室温融化，15000rpm 离心 15 分钟。

2.5.3 弃上清，沿管壁缓缓滴入 1ml 70% 乙醇，轻轻旋转洗一次后倒掉，将离

心管倒扣于吸水纸上 1 分钟，真空抽干 15 分钟（以无乙醇味为准）。

2.5.4 取出样品管，用 50µL 灭菌双蒸水溶解沉淀，作为模板备用。
2.6 PCR 扩增

总体积 20µl，取灭菌双蒸水 8µl，2.5mmol/L dNTP、8pmol/µL 扩增引物、

15mmol/L 氯化镁、10×PCR 缓冲液、0.5 单位 TaqDNA 聚合酶各 2µL，2µL 模板
DNA。混匀，作好标记，加入矿物油 20µL 覆盖（有热盖的自动 DNA 热循环仪不

用加矿物油）。扩增条件为 94℃ 3 分钟后，94℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 30s 循环 35

次，72℃延伸 5 分钟。

2.7 电泳

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