Page 447 - 新编动物防疫检疫手册
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凝胶成像仪（或紫外分析仪）、液氮或 -70℃冰箱、微波炉、组织研磨器、-20℃
冰箱、可调移液器（2µL 、20µL、200µL、1000µL）。
2.2 耗材
眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL 一次性注射器、1.5 mL 灭菌离心管、0.2
mL 薄壁 PCR 管、琼脂糖、500 mL 量筒、500 mL 锥形瓶、吸头（10µL、200µL、
1000µL）、灭菌双蒸水。
2.3 引物设计
根据 GenBank 上已发表的炭疽杆菌 POX1 质粒序列，设计并合成了以下两条
引物：
ATXU：5’-AGAATGTATCACCAGAGGC-3’ ATXD：5’-GTTGTAGATTGGAGC
CGTC-3’，此对引物扩增片段为 394bp。
2.4 样品的采集与处理
2.4.1 样品的采集
病死或扑杀的动物取肝脏或脾；待检的活动物，用注射器取血 5 ～ 10mL，
2 ～ 8℃保存，送实验室检测。
2.4.2 样品的处理
每份样品分别处理。
2.4.2.1 组织样品处理
称取待检病料 0.2g，置研磨器中剪碎并研磨，加入 2mL 消化液继续研磨。取
已研磨好的待检病料上清 100µL 加入 1.5 mL 灭菌离心管中，再加入 500µL 消化
液和 10µL 蛋白酶 K 溶液，混匀后，置 55℃水浴中 4 ～ 16h。
2.4.2.2 待检菌的处理
取培养获得的菌落，重悬于生理盐水中。取其悬液 100µL 加入 1.5mL 灭菌离
心管中，再加入500µL 消化液和10µL 蛋白酶K溶液，混匀后，置55℃水浴中过夜。
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