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畜牧兽医技术创新及发展 第二章 动物疫病监测及防控
Innovation and Development of Animal Husbandry and Veterinary Technology

的主要特点是特异性强、敏感性高、速度快，许多国家已将它作为执行猪瘟消灭
计划的法定诊断试验。但其非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性
不足，技术程序也比较复杂，且需要荧光显微镜，设备较昂贵。
3. 分子生物学诊断方法

（1）聚合酶链反应
聚合酶链反应（PCR）因其具有简便、快速、灵敏度高、特异性强等特点，
已成为最为广泛地应用于诊断重大疫病的分子生物学技术之一。核酸探针技术是
利用核苷酸碱基顺序互补的原理，用特异的基因探针即识别特异碱基序列（靶序

列）的有标记的一段单链 DNA（或 RNA）分子，与被测定的靶序列互补，以检
测被测靶序列的技术。因为每一种病原都具有独特的核酸片段，通过分离和标记
这些片段就能制备出探针，用于疾病的诊断等研究。吕翠等以地高辛（DIG）标
记猪流感病毒 M 基因的保守片段制成核酸探针，该核酸探针特异性强、敏感性

高，最低能检出约 5pg 的 H3 亚型 SIVRT-PCR 产物。核酸探针技术具有特异性
强、准确可靠等优点，但需要合成核酸探针，诊断费用较高。应用 RT-PCR 已成
功测定了多株 CSFV 的全基因序列，为猪瘟致病机理、免疫机制、检测防控提供
了坚实的基础。薄清如等分别建立了 FMDV 群、O 型和 Asia1 型特异性实时荧

光 RT-PCR 检测方法，设计了 FMDV 的 3D、VP3 和 3C 区域的引物和探针，结
果是 3 种 FM-DV 实时荧光定量 RT-PCR 方法均具有良好的特异性，可以很好地
将 FMDV 与传染性牛鼻气管炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒、赤羽病病毒和猪呼
吸系统冠状病毒区分。LurchachaiwongW 等对比了用于快速检测 PRRSV 的传统

RT-PCR 方法和基于传统 RT-PCR 建立的两种新方法（一种使用嵌合荧光法，另
一种使用探针化学法），结果显示两种方法都能用于 PRRSV 的快速检测，其灵
敏度分别为 104copies/vtL 和 103copies/L。陈坚等在保守区域设计一对引物，并
优化 RT-PCR 反应条件，建立了一种可检测出多种亚型猪源流感病毒的 RT-PCR
方法，且该方法具有高特异性和敏感性，适用于 SIV 的诊断和推广应用。LeiferI

等描述了一种以 NS5A 区域为模板的新型 CSFVrRT-PCR 系统，该方法能在不依
赖 5′非编码区的前提下提供对 CSFV 基因组的可靠检测。Zhang L 等阐述了一
种快速、灵敏、精确的半套式 RT-PCR 用于诊断区分新城疫强毒和无毒毒株。

（2）基因芯片
基因芯片的基本原理是将大量已知序列的寡聚核苷酸探针固定在玻璃等支持

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