Page 51 - 畜牧兽医疫病防控与技术分析

第二章 口蹄疫防治技术

要作用，但它们的生产技术要求很高，而且价格昂贵。Nb 则因其良好的生物特性、
物理化学特性以及生产成本相对实惠的优势被广泛应用于病毒检测。
（四）4 Nb 在中和口蹄疫病毒中的作用

现如今口蹄疫的防御主要依赖于灭活病毒疫苗的接种。目前的疫苗针对口蹄
疫病毒虽具有一定的保护性免疫反应，但是由于病毒复制能力强、传播速度快，
或许已经超过了其免疫防御系统的清除速度，且口蹄疫病毒血清型间显著的抗原
多样性，使开发具有抗病毒逃逸能力的中和抗体显得尤为重要。

Harmsen 等通过筛选 4 个大羊驼的噬菌体展示免疫库，鉴定出 24 个能够在
体外中和 0 型口蹄疫病毒的 Nb，其中 M8 和 M170 的单个中和活性最强；将 M8
和 M23 混合免疫时起到的保护作用更显著，说明 M8 和 M23 会对口蹄疫病毒表
现出较强的协同中和作用。2008 年 Harmsen 等又将 3 个结合口蹄疫病毒的 Nb

（M3、M8 和 M23）与结合口蹄疫病毒的猪 IgM 分别进行融合，在体外获得了
3 个双功能的中和抗体，这 3 株双特异性 Nb 抗体半衰期比单价 Nb 延长了 100 倍，
在体外与单价抗体一样有效中和了口蹄疫病毒，而且可有效减少病毒血症和排毒，
抑制病毒传播。

随着研究的进行，Harmsen 等同发现，仅两种融合的 VHH 对猪起到的保护
作用时间短，因此将先前构建的两个 VHH 的基因融合体（VHH2）与其他型号
口蹄疫病毒的 VHH 结合，得到两个 Nb。实验结果表明两个 Nb 共同作用要比
单个 Nb（VHH）更有效地中和口蹄疫病毒，在猪口蹄疫激发感染前 24h 注射这

两个 Nb 的混合物可减少并延迟临床疾病、病毒血症和病毒脱落的发展。Dong
等为了研究 M8 和 M170 的血清型特异性或交叉反应性，通过 ELISA 检测发现
M170 仅与 0 型结合，而 M8 可以和 A、Asial 和 C 血清型结合；为了探索这两种
抗体是否能同时结合病毒，他们进行了竞争性表面等离子体共振（surfaceplasmon

resonance，SPR）分析，证明一种抗体的结合会阻断另一种抗体的附着，因此二
者存在竞争关系；然后他们给豚鼠体内注射特异性抗体，通过检测豚鼠体内病毒
载量来评估这两种抗体的保护效果，结果发现在服用治疗性 Nb 之前，豚鼠体内
可检测到高水平的病毒复制，而注射 M8 和 M170 后豚鼠体内病毒滴度大幅降低。

通过结构分析得出，M8 和 M170 会分别识别 RGD 基序和 HS 结合位点，阻止口
蹄疫病毒附着到宿主细胞表面，具有阻断病毒突变逃逸的巨大潜力。

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