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Animal Husbandry and Veterinary Disease Prevention and Control and Technical Analysis
畜牧兽医疫病防控与技术分析
2. 病毒核酸检测
（1）实时荧光定量 PCR
通过将口蹄疫病毒各血清型全基因组序列进行比对，可针对不同血清型差异
较大的结构蛋白基因设计不同的引物，再根据荧光素的发光原理，利用 TaqMan
等技术，通过 PCR 扩增进行血清型鉴别诊断。实时荧光定量 PCR 是一种常用的
检测病毒样本的方法，结果可直接通过荧光 PCR 仪进行检测。李世芳等用口蹄
疫病毒 MYA/98 株对 3~4 日龄的乳鼠进行攻毒，用实时荧光定量 PCR 检测攻毒
后 0、5、10、15h 肠道组织中 IFN-ε 相对表达量的变化，为Ⅰ型干扰素的不同
亚型在抗口蹄疫病毒感染过程中的作用提供了实验数据。蔡顺萍等利用实时荧光
定量 PCR 方法用 3 种口蹄疫试剂盒检测了 O 型抗原并进行各项指标的比对，为
实验室选择试剂盒提供依据。
（2）多重荧光定量 PCR
多重荧光定量 PCR 在荧光定量 PCR 的基础上，通过设计多个探针和引物，
可在一次 PCR 反应中同时对多个模板进行定量检测。吴绍强等利用多重荧光定
量 PCR 法研发出的口蹄疫病毒试剂盒，可同时检测 O、A 和 Asia Ⅰ型的口蹄疫
病毒。多重 PCR 检测方法可同时检测同种病毒的不同血清型，也可以用于不同
病毒的同时检测。宋爽等根据牛病毒性腹泻病毒的 5’UTR 基因、牛传染性支气
管炎病毒的 gB 基因和口蹄疫病毒的 3D 基因建立了特异性强、灵敏度高的多重
荧光定量 PCR 的方法，可同时快速鉴别检测这 3 种病毒。
（3）定型 RT-PCR
定型 RT-PCR 同其他 PCR 方法一样，避免了病毒分离培养的危险性和基因
序列分析的繁琐性。与多重 PCR 方法类似，能同时检测几种不同的血清型，
李金海等根据我国主要流行的 3 种血清型及其主要亚型设计了 2 对引物（FW1/
FW2、FN1/FN2），建立了能够同时特异性检测 O 型、A 型及 Asia Ⅰ型口蹄疫
病毒 VP1 全基因的 RT-nPCR 方法，并结合测序技术，能对检测样本进行准确定型，
且灵敏度高，特异性强。
（4）反转录环介导等温扩增技术（RT-LAMP）
作为一种新颖的恒温核酸扩增方法，可在 65℃恒温条件下完成扩增反应，
不需要热变性、电泳和紫外观察等过程，扩增产物可通过荧光定量 PCR 仪检测
荧光强度或通过沉淀反应浊度仪检测焦磷酸镁的沉淀浊度来进行定量分析，也可
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