Page 29 - 化学分析与检测技术

第一章 化学分析方法

子化合物，设置柱温时要高于室温，对于具有生物活性的生物分子，温度过高会
使其失去生物活性，所以柱温要设置为低于室温。
根据范第姆特方程，流动相的流速会对色谱柱的柱效和组分的保留时间有一
定的影响，在一定范围内，流速越大，柱效会提高，分析时间会缩短，但超过某

一流速值，柱效就会降低，这个流速值称为最佳流速。其它条件相同的前提下，
色谱柱内径不同，设定的流速也应当不同，比如当内径是 4.6mm 时，通常将流
速设定为 1mL/min。
在对液相色谱仪进行检定的过程中，会受基线噪声、色谱峰高重复性、标准

物质不确定度及进样量等影响，进而影响测量结果和液相色谱仪的检定结果不确
定性。例如，在对设备的基线噪声不确定度评定过程中，因基线噪声的测量需要
提取 30min 基线，并对 30min 内的基线峰值进行检测，借助游标卡尺的方式进行
测量以得出较为准确的检定数据，若满足不确定度 B 类检测评定的数据，则可

以认为其达到 0.01mm 度量。通常情况下调整结果会以噪声峰的形式展现出来，
如果峰高处于 1~10mm 则即为 1mm，表示噪声测量的相对不确定度值为 1%。
实际上在化学实验中，结合 JJG705—2014《液相色谱仪检定规程》和检定
证书进行基线噪声测量时，仍然会出现较小的不确定度，即使其标准溶液浓度检

测参照国家标准物质中心给出的 4% 不确定度。例如，在色谱峰高按照检定规程
进行连续进样 10 次操作，其最终结果仍会出现一定偏差。通过上述分析可知，
实验不确定度的产生受进样量体积、合成量体积以及相对扩展值等因素影响，从
而造成液相色谱仪即使严格按照相关规定进行操作，也会出现一定程度的结果不

确定性，因此要通过精细化实验操作，严格按照实验步骤进行，以最大限度降低
实验结果的偏差。
4. 高效液相色谱的检测器
高效液相色谱法的检测器分为示差折光检测器、紫外吸收检测器、光电二极

管阵列检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器等。不同的检测器都有相应的优
势和缺陷，要根据被测物的种类、被测物含量以及流动相对测定是否有影响等因
素，选择合适检测器。如光电二极管阵列检测器可以全波段扫描，能得到三维立
体图谱，而紫外吸收检测器只能用设定的波长对被分离后的组分进行扫描。示差

折光检测器常用于萜类化合物、多糖类化合物含量的测定，但不能采用梯度洗脱。
荧光检测器适用于能显示荧光的被测物含量检测，常用于生化分析和药物分析中，

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