Page 194 - 新编动物防疫检疫手册

扩增后测序鉴定，判定为美洲幼虫腐臭病。
实验室 PCR 鉴定方法：挑取培养的单菌落至 20“L0.2M 的 NaOH，消化 8min；

取上述 2“L 消化液至 98“L 无菌水，制备 PCR 模板；扩增 16SrRNA，PCR 扩增体系为：

DNA 模板 4“L
27F 2.5“L

1492R 2.5“L

聚合酶 Mix 25“L

ddH 2 O 16“L

扩增条件为：94℃，10min；30 个循环 (94℃，30s；Tm-5℃，30s；72℃，
45s；)；72℃，10min。

引物序列：27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG

1492R：TACGGCTACCTTGTTACGACTT
电泳：1% 琼脂糖凝胶电泳，出现 1.5kbp 条带，则送测序公司测序，与幼虫

芽孢杆菌的序列相似性大于 97%，即可判断为幼虫芽孢杆菌。

2. 欧洲蜜蜂幼虫腐臭病

从蜂群中抽取部分未封盖 2—4 日龄幼虫脾，挑取其中的死幼虫 5—10 条，置

研钵中，加 2—3ml 无菌水研碎后制成悬浮液、涂片，经革兰氏染色后，在 1000—
1500 倍的显微镜下进行检查，发现 0.5×1.0“m 呈革兰氏阳性的单个、短链或呈

簇状排列的披针形球菌，同时有许多杆菌和芽孢杆菌等多种微生物，培养出的单

菌落经 PCR 扩增后测序鉴定，判定为欧洲幼虫腐臭病。实验室 PCR 鉴定方法同美
洲幼虫腐臭病。

3. 蜜蜂孢子虫病

在蜂箱门口与蜂箱上梁处避光收集 8 日龄以下的成年工蜂 60 只，取出 30 只 ( 另

30 只备用 ) 消化系统，置研钵中，加 2—3ml 无菌水研碎后制成悬浮液，置干净载

184
184