Page 313 - 新编动物防疫检疫手册
P. 313
卸微量板，则根据需要取出几条。在试验台上放置 20min，再洗涤 5 次，扣干。
3.3 加对照抗原和待检样品
3.3.1 布局
空白和各阳性对照、待检样品在 ELISA 板上的分布位置如图 3-1< Ⅱ > 所示。
3.3.2 加样
3.3.2.1 第 5 和第 6 列为空白对照（C-），每孔加 50μL 稀释液 A。
3.3.2.2 先将各型阳性对照抗原分别以稀释液 A 适当稀释，然后加入与包被抗
体同型的各行孔中，C++ 为强阳性，C+ 为阳性，可以用同一对照抗原的不同稀释度。
每一对照 2 孔，每孔 50μL。
3.3.2.3 按待检样品的序号（S1、S2 ...）逐个加入，每份样品每个血清型加 2 孔，
每孔 50μL。 37℃ 振荡 1h，洗涤 5 次，扣干。
3.4 加检测抗体
各血清型豚鼠抗血清以稀释液 A 稀释至工作浓度，然后加入与包被抗体同型
各行孔中，每孔 50μL。37℃振荡 1h。洗涤 5 次，扣干。
3.5 加酶结合物
酶结合物以稀释液 B 稀释至工作浓度，每孔 50μL。
37℃振荡 40min。洗涤 5 次，扣干。
3.6 加底物溶液
试验开始时，按当天需要量从冰箱暗盒中取出 OPD，放在温箱中融化并使之
升温至 37℃。临加样前，按每 6mL OPD 加 3％双氧水 30μL（一块微量板用量），
混匀后每孔加 50μL。37℃振荡 15min。
3.7 加终止液
显色反应 15 分钟，准时加终止液 1.25mol/L H2SO4。50μL/ 孔。
3.8 观察和判读结果
303
303
