Page 417 - 新编动物防疫检疫手册

CSFV 抗体存在）。如果被检样本阻断率在 30 ～ 40％之间，应在数日后再对该动
物进行重测。

附件 7
荧光抗体病毒中和试验

本方法是国际贸易指定的猪瘟抗体检测方法。 该试验是采用固定病毒稀释血

清的方法。测定的结果表示待检血清中抗体的中和效价。具体操作如下：

将浓度为 2×105 细胞 /mL 的 PK-15 细胞悬液接种到带有细胞玻片的 5cm 平

皿或莱顿氏管（leighton’s），也可接种到平底微量培养板中；
细胞培养箱中 37℃培养至汇合率为 70% ～ 80% 的细胞单层（1 ～ 2 天）。

将待检血清 56℃灭活 30 分钟，用无血清 EMEM 培养液作 2 倍系列稀释；

将稀释的待检血清与含 200TCID50/0.1mL 的猪瘟病毒悬液等体积混合，置

37℃孵育 1 ～ 2 小时；
用无血清 EMEM 培养液漂洗细胞单层。然后，加入血清病毒混合物，每个稀

释度加 2 个莱顿氏管或培养板上的 2 个孔，37℃孵育 1 小时；

吸出反应物，加入 EMEM 维持液 [ 含 2% 胎牛血清（无 BVDV 抗体），56℃

灭活 30 分钟 ]、0.3％谷氨酰胺、青霉素 100IU/mL、链霉素 100IU/mL），37℃继
续培养 48 ～ 72 小时；最终用荧光抗体染色法进行检测（见附件 2）。

根据特异荧光的有无来计算中和效价。

（中和效价值达到多少表示抗体阳性或抗体达到保护）

407
407