Page 414 - 新编动物防疫检疫手册
P. 414
条件下至少放置 1 小时。
3.1 每孔加入 25uLCSFV 特异性单克隆抗体。此步骤可以用多道加样器操作。
3.2 在相应孔中分别加入 75uL 阳性对照、阴性对照，各加 2 孔。注意更换吸头。
3.3 在其余孔中分别加入75uL制备好的样品，注意更换吸头。轻轻拍打酶标板，
使样品混合均匀。
3.4 置湿盒中或用胶条密封后室温（18 ～ 22℃）孵育过夜。也可以孵育 4 个
小时，但是这样会降低检测灵敏度。
3.5 甩掉孔中液体，用洗涤液（1×）洗涤 5 次，每次洗涤都要将孔中的
所有液体倒空，用力拍打酶标板，以使所有液体拍出。或者，每孔加入洗涤液
250 ～ 300uL 用自动洗板机洗涤 5 次。注意：洗涤酶标板要仔细。
3.6 每孔加入 100uL 稀释好的辣根过氧化物酶标记物，在湿盒或密封后置室
温孵育 1 小时。
3.7 重复操作步骤 3.5；每孔加入 100uL 底物液，在暗处室温孵育 10 分钟。
第 1 孔加入底物液开始计时。
3.8 每孔加入 100uL 终止液终止反应。加入终止液的顺序与上述加入底物液
的顺序一致。
3.9 在酶标仪上测量样品与对照孔在 450nm 处的吸光值，或测量在 450nm 和
620nm 双波长的吸光值（空气调零）。
3.10 计算每个样品和阳性对照孔的矫正 OD 值的平均值（参见“计算方法”）。
4 计算方法
首先计算样品和对照孔的 OD 平均值，在判定结果之前，所有样品和阳性对
照孔的 OD 平均值必须进行矫正，矫正的 OD 值等于样本或阳性对照值减去阴性对
照值。
矫正 OD 值＝样本 OD 值－阴性对照 OD 值
404
404
