Page 412 - 新编动物防疫检疫手册

2 样品制备
注意：制备好的样品或组织可以在 2 ～ 7℃保存 7 天，或 -20℃冷冻保存 6 个

月以上。但这些样品在应用前应该再次以 1500g 离心 10 分钟或 10000g 离心 2 ～ 5

分钟。
2.1 外周血白细胞

2.1.1 取 10mL 肝素或 EDTA 抗凝血样品，1500g 离心 15 ～ 20 分钟。

2.1.2 再用移液器小心吸出血沉棕黄层，加入 500uL 样品稀释液（1×），在

旋涡振荡器上混匀，室温下放置1小时，期间不时旋涡混合。然后直接进行步骤2.1.6

操作。
2.1.3 假如样品的棕黄层压积细胞体积非常少，那么就用整个细胞团（包括红

细胞）。将细胞加进 10mL 的离心管，并加入 5mL 预冷（2 ～ 7℃，下同）的 0.17M

NH4Cl。混匀，静置 10 分钟。
2.1.4 用冷（2 ～ 7℃）超纯水或双蒸水加满离心管，轻轻上下颠倒混匀，

1500g 离心 5 分钟。

2.1.5 弃去上清，向细胞团中加入 500uL 样品稀释液（1×），用洁净的吸头

悬起细胞，在旋涡振荡器上混匀，室温放置 1 小时。期间不时旋涡混合。

2.1.6 1500g 离心 5 分钟，取上清液按操作步骤进行检测。
注意：处理好的的样品可以在 2 ～ 7℃保存 7 天，或 -20℃冷冻保存 6 个月以

上。但这些样品在使用前必须再次离心。

2.2 外周血白细胞（简化方法）
2.2.1 取 0.5 ～ 2mL 肝素或 EDTA 抗凝血与等体积冷 0.17 M NH4Cl 加入离心

管混合。室温放置 10 分钟。

2.2.2 1500g 离心 10 分钟（或 10000g 离心 2 － 3 分钟），弃上清。

2.2.3 用冷（2 ～ 7℃）超纯水或双蒸水加满离心管，轻轻上下颠倒混匀，

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