Page 233 - 计量检定技术分析与质量控制研究

第七章 色谱分析技术开发与检测

第七章 色谱分析技术开发与检测

第一节 色谱分析技术的开发优化

一、液相色谱分析技术的开发

采用液相色谱法可以分析多种不同样品里的不同组分，同一色谱条件下也可

以同时分析几种甚至几十种有机物。为了提高工作效率，液相色谱新方法的开发
对实际检测有着十分重要的指导意义。但是，如何快速有效地开发新方法对许多
检测者来说有一定难度，许多初学者更是摸不到头绪，简单来说，一个新的液相

色谱分析方法主要从分析条件的优化和检测方法的评价入手。
（一）分析条件的优化
确定分离模式。待测物的分子量小于 5000 时，先看待测物是溶于有机相还
是溶于水相，一般来说，待测物溶于有机溶剂的（正己烷除外）采用反向模式，
待测物溶于水也采用反向模式。当待测物的分子量大于 5000 时，溶于有机物的

待测物采用溶胶渗透方式，溶于水的待测物选用凝胶过滤方式。
色谱条件的确定。色谱柱的选择。色谱柱可根据待测物的化学性质选择，最
开始尽量选择万能色谱柱，既分析成功可能性最高的色谱柱，但当分离效果不好

时，要根据待测物性质，更换其他类型色谱柱。现在大部分液相色谱分析都使用
反相液相色谱柱，如 C18 色谱柱可用于分析多种添加剂、药物等，是性价比十
分高的色谱柱，蛋白质的分析可采用大孔径 C8 柱，这两种色谱柱之所以运用广
泛是因为在大多数情况下，使用这两种色谱柱都可以达到很好的分离效果。另外，

新的柱子在进行启用时要注意活化，仔细阅读色谱柱说明书，按照色谱柱保存溶
液活化色谱柱 2~3h，流速由低到高。采用柱效报告中分析条件对标样进行分析，
观察柱效、压力和基线。在日常使用中，做好色谱柱的维护，以延长使用寿命。
流动相的选择。流动相最好选用溶剂对于待测样品有合适的极性和良好的选

择性，最好是色谱纯，由于高效液相色谱仪灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要
求高，不纯的溶剂会引起基线不稳。同时，流动相的化学稳定性要好，不能选与

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