Page 153 - 医学检验技术发展与创新

第四章 分子诊断临床应用

数字 PCR 不需要标准曲线，对大部分抑制不灵敏，它是针对终点荧光信号的绝
对定量，并不依赖模板 Ct 值，具有超高灵敏度和准确度。Yan 对不同治疗期的
10 个 H7N9 病人进行定量检测，结果表明，数字 PCR 检出限低于定量 PCR。目
前商品化的微滴式数字 PCR，已被大量应用于副痘病毒属病毒、口腔病毒、牛丘

疹病毒、肠病毒、巨细胞病毒、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌等临
床领域。
7. 核酸等温扩增技术
目前在临床和现场病原微生物快速检测中具有良好发展前景的核酸等温扩

增技术是环介导等温扩增（LAMP)。LAMP 是针对靶基因的 6 个区域设计 4 种特
异引物，利用一种具有链置换活性的 DNA 聚合酶在等温条件保温 30 ～ 60min，
完成核酸扩增反应，产物利用荧光或浊度检测进行定量分析。该技术不依赖专门
仪器，不需要热循环，扩增产物可通过肉眼或浊度计判断，灵敏度和特异性均优

于常规 PCR，成本远低于定量 PCR，但靶序列最好控制在 300bp 以内，同时由于
该技术灵敏度高，极易被污染而造成高假阳性等问题。目前，LAMP 技术在丙型
肝炎病毒、乙脑病毒、甲型流感病毒和腮腺炎病毒，以及细菌、支原体等检测领
域已得到广泛应用。张毅将叠氮溴化乙啶（EMA）与 LAMP 相结合，建立了一种

能快速检测副溶血性弧菌活细胞的新方法，最低检测限为 1×10cfu/mL，而 PCR
法最低检测限为 1×103cfu/mL，
8. 核酸适配体技术
适配体是通过指数富集的配体系统进化技术（SELEX）从体外人工合成的

随机寡核苷酸序列库中反复筛选获得的一种能以极高亲和力结合小分子物质、蛋
白或酶的寡核苷酸片段，已广泛用于临床诊断和治疗等领域。SELEX 技术包括 5
个步骤：结合、分离、洗脱、扩增和调节，其中最为关键的是筛选适配体靶分子
的选择和结合序列的分离。适配体具有靶标范围广、亲和力和特异性高、化学性

质稳定和便于修饰等优点，可筛选针对微生物某一特定蛋白或核酸的适配体，以
用于其鉴定和分型，有望未来取代抗体，但与抗体相比，针对不同病原微生物的
适配体种类有限。蔡江丽筛选获得结核分枝杆菌分泌蛋白 64 抗体的适配体并进
行血清学检测方面的研究。梁红茹综述了核酸适配体在病原微生物学中的应用，

作者认为适配体难以穿过细胞膜与靶分子结合，且靶分子半衰期较短，提出了位
点特异性传递系统和基因治疗两种新思路。

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