Page 150 - 医学检验技术发展与创新

医学检验技术发展与创新
Development and Innovation of Medical Laboratory Technology

传统方法需要 2 ～ 4d。陆盛珍建立了一种丝网印刷型 DNA 生物传感器用于病原
微生物，该技术简便快速、成本低，适合短链 DNA 检测，非常有助于病原微生
物分型等研究。
（二）基于扩增的分子诊断技术

1. 常规 PCR 技术
常规 PCR 是根据特定基因的核酸序列，设计一对特异性寡核苷酸引物，体
系中加入 DNA 聚合酶和 4 种 dNTP，以特定基因为模板的一种体外核酸扩增技术。
该法简便快速、成本低，但稳定性差、假阳性高及容易产生非特异性产物，无法

区分活 / 死细胞和判断微生物是否具有感染力等。目前已衍生了许多 PCR 技术，
如免疫 PCR(IM-PCR)、多重 PCR(MPCR)、巢式 PCR(NPCR)、单链构象多态性
（PCR-SSCP)、限制性片段长度多态性（RFLP)、随机扩增多态性 DNA(RAPD)、
定量 PCR(qPCR)、数字 PCR(dPCR）和核酸适配体技术等。

2. 多重 PCR 技术
在常规 PCR 基础上通过增加引物对数，衍生出多重 PCR 技术。常规 PCR 仅
采用一对引物，而多重 PCR 则可在同一个反应体系中扩增多个目的基因。多重
PCR 主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定，也广泛应用于某些遗传病及癌

基因的分型鉴定，如肝炎病毒、肠道致病性细菌、性病、战伤细菌及生物战剂细
菌和需特殊培养的无芽胞厌氧菌检测等。卫沛楠利用多重 PCR 检测了 144 株食
源性金黄色葡萄球菌的 9 种肠毒素基因，并对其分布情况进行了分析。WANG 利
用 Real-MRSA and Real-MRCoNS multiple real-time PCR assays 试剂盒对 350 例血

培养阳性样本进行检测，发现其对 16SrRNA、nuc 和 mecA 基因的敏感性分别为
100%，97.2% 和 99.2%，很好地满足了临床检测的实际要求。多重 PCR 技术虽
然得到了广泛应用，但还存在敏感性低、特异性不强及假阳性高等不足。
3. 随机扩增多态性 DNA 技术

RAPD 是用任意短序列核苷酸引物，在低复性温度下对同源性较高的基因组
DNA 区域进行 PCR 扩增。由于模板任意引物杂交的数目和位置因菌株而异，理
论上可形成该菌株的特定图谱。通过脉冲场凝胶电泳进行多态性检测，可反映出
不同菌株基因组 DNA 特点，因而可作为 DNA 分型的有效手段，在分子流行病学

及菌株分子分型鉴定上发挥着越来越重要的作用。该技术简便快速、分辨率高于
RFLP，但由于其对 DNA 浓度和质量、聚合酶类型等要求较为苛刻，重复性不理想。

140
140