Page 151 - 医学检验技术发展与创新

第四章 分子诊断临床应用

高璐应用 RAPD 技术对淡水中分离的 59 株副溶血弧菌和 107 株溶藻弧菌进行分
子分型，发现副溶血弧菌有 18 个基因型，溶藻弧菌有 21 个基因型。
4. 免疫 PCR 技术
传统酶联免疫吸附（ELISA）是通过酶催化底物显色进行定性判断，而 IM-

PCR 是利用 PCR 扩增取代酶底物催化显色反应，与抗原结合的特异抗体通过连
接分子与 DNA 结合，经扩增可定性定量样本中核酸含量，其特异性和灵敏性均
高于 ELISA。IM-PCR 技术一般分为两个过程，第一步是传统的 ELISA 检测；第
二步是通过 PCR 扩增产物检测抗原分子的含量。

PCR-ELISA 结合了 PCR、核酸杂交和 ELISA 等 3 种技术的优点，具有快速
简单、适合大量样品、不需要电泳和纯化，特异性强和简便快速等特点，但无
法同时检测多种病原微生物。史艳宇针对空肠弯曲菌 16SrRNA 设计特异性引物
和探针，成功建立了食品空肠弯曲菌的 PCR-ELISA 检测方法，与常规 PCR 相比

较，灵敏度提高了 10 ～ 100 倍，可用于临床诊断和食品微生物检测等领域。胡
金强以金黄色葡萄球菌核酸酶 nuc 基因为靶标，以地高辛标记引物进行 PCR 扩
增，扩增产物与生物素标记探针杂交，然后与链霉素杂交，通过抗地高辛抗体显
色建立金黄色葡萄球菌检测技术。韩来辉根据沙门菌 invA 基因设计引物和探针，

建立了其 PCR-ELISA 检测方法，对 27 批液体乳中沙门菌进行检测，发现优化后
PCR-ELISA 特异性和灵敏度更高且重复性好。
免疫磁分离（IMS）是将针对目标病原微生物的抗体偶联至磁性微球上，然
后与待检样品混合。如果样品中存在该微生物，则形成磁珠 - 微生物复合物。

当施加外界磁场时，基质中目标微生物得以高效富集。该方法受磁珠质量和粒
径大小、磁珠与抗体亲和力、目标菌 / 杂菌与磁珠比、孵育条件和磁性粒子本
身对病原微生物存在潜在毒性等不利因素影响，但具有从复杂样品体系中快速
高效捕获或富集目标病原微生物等优势。该技术可与 PCR、免疫层析、流式细

胞、免疫传感器和免疫荧光，甚至拉曼光谱和红外光谱等技术联用，已被国内外
检测部门作为病原微生物富集和分离等前处理的重要手段。黄震建立了针对猪
霍乱沙门氏菌的免疫磁分离结合荧光微球免疫层析技术，在牛奶中的检出限为
7.6×105cfu/mL，与单一的荧光微球免疫层析相比较，极大降低了检出限。胡霏

建立了针对鼠伤寒沙门氏菌的免疫磁分离结合荧光免疫层析快速检测方法，灵敏
度达 105cfu/mL。马凯利用免疫磁分离技术结合三重荧光定量 PCR 同时检测食品

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