Page 152 - 医学检验技术发展与创新

医学检验技术发展与创新
Development and Innovation of Medical Laboratory Technology

中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌，检出限该方法灵敏度高、特异性好、
准确度高。
5. 定量 PCR 技术
该技术利用荧光染料或荧光探针，对扩增过程中荧光信号进行实时监测，

通过标准曲线准确定量样品初始 DNA 拷贝数。该技术的核酸扩增和检测在同一
体系中进行，避免了开盖检测造成的污染；产物无需电泳，特异性好、灵敏度和
自动化程度高；具有可与生物芯片或免疫磁珠等技术联用等优势。定量 PCR 技
术已成为临床病原微生物检测的常规手段之一，广泛用于乙型肝炎病毒、丙型肝

炎病毒、人类免疫缺陷病毒和流感病毒等检测，但如何进一步加强该技术的质量
监管体系建设、减少或抑制操作过程中的干扰因素等，是摆在其面前的主要挑战。
该技术主要分为双链掺入法、Taqman 探针、分子信标和双杂交探针等。双链掺
入法并未在临床实践中得到认可；Taqman 探针具有成功的商业化推广模式，在

临床中应用最为广泛；分子信标极大地降低了荧光背景，特异性更高；相比单探
针，双杂交探针特异性进一步得到提高。
国内市场主要有 Biostest 公司生产的沙门氏菌、李斯特菌和大肠杆菌 O157：
H7 检测条、bioline 沙门氏菌和李斯特菌等试剂盒；德国 IFP 公司的沙门氏菌、

李斯特菌、大肠杆菌 O157：H7、金黄色葡萄球菌和阪崎肠杆菌等试剂盒；美国
BioXL 公司各种病原微生物荧光定量 PCR 试剂盒。高正琴利用 Taqman MGB 探
针建立支原体快速检测方法，对空肠弯曲菌、肺炎克雷白杆菌、大肠埃希菌、铜
绿假单胞菌和肺炎链球菌等均无交叉反应，检测灵敏度达 9.2 拷贝。李小芳建立

了鉴别阪崎克罗诺杆菌和丙二酸盐阳性克罗诺杆菌的双重荧光定量 PCR 法，可
快速检测出婴幼儿配方奶粉中是否含有阪崎肠杆菌。Roche 商业化的 Light Cycler
SeptiFast(LCSF）试剂盒对革兰阴性菌、革兰阳性菌和真菌等敏感性可达 300cfu/
mL，且不受抑制物感染，但所使用仪器价格相当昂贵，因此在临床应用中受到

一定限制。
6. 数字 PCR 技术
数字 PCR 是首先将反应体系进行微球乳糜液化，再将乳糜液分散至芯片微
孔中，使每孔存在≤ 1 个核酸模板。扩增后利用 Taqman 试剂及染料标记探针，

对每孔荧光信号进行检测，如有靶核酸模板，则微孔会释放荧光信号，统计分析
两种信号的反应单元比例和数目，实现对样品的绝对定量。与定量 PCR 不同，

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