Page 45 - 畜牧兽医疫病防控与技术分析

第二章 口蹄疫防治技术

如 VP1 蛋白的第 41 和 51 位（B-C 环）、133、140 和 143 位（G-H 环）、201、
204 和 209 位（C 端））氨基酸，VP3 的 71 和 75 位（B-C 环）、131 位（E-B 区）、
174 和 179（G-H 环）及 219 位氨基酸（C 末端）都出现了突变。而且这些抗原

位点及周边位点的变异在病毒逃避中和作用方面有重要的意义。因此，口蹄疫病
毒抗原变异是在宿主免疫压力下直接选择的结果，抗原的变异是体内免疫系统直
接选择的结果。
（二）检测抗原

1. 病毒分离鉴定
（1）细胞培养与病毒分离鉴定
病毒分离鉴定是口蹄疫病毒诊断最可靠的办法，通常使用豚鼠肾、仓鼠肾、
猪肾、牛肾、牛舌上皮等原代细胞或传代细胞，使病毒在细胞内增殖，根据细胞

病变效应（CPE）来进行分离鉴定。葛淑敏等在 BHK-21 细胞内进行病毒增殖并
利用电镜进行观察，通过反向间接血凝试验、RT-PCR 进行扩增后，根据测序结
果进行比对，最终确定为 O 型 Cathay 口蹄疫病毒株。龚婷等用 C57BL/6 乳鼠成
功分离培养 3 株不同亚型的 O 型口蹄疫病毒，并用 RT-PCR 技术鉴定，成功建立

了口蹄疫病毒的 C57BL/6 小鼠模型，为筛选优良口蹄疫疫苗候选毒株提供依据。
但以上两个试验均要确定病毒的血清型后才能开始后续试验，且需要试验人员具
有较多实践经验。
（2）病毒 VP1 基因序列分析

口蹄疫病毒蛋白在蛋白酶水解后，裂解为 4 种结构蛋白（VP1~VP4）和多种
非结构蛋白。VP1 蛋白是主要的保护性抗原，由于 VP1 基因变异最频繁，因此
其抗原性差异是进行口蹄疫病毒血清型的划分依据。获得的病毒 VP1 序列后与
已公布的序列进行比对分析，便可确定病毒的血清型及其亚型。李琪等对广东地

区 2015~2016 年收集的猪病料提取 RNA，进行反转录后利用 O、A 和 Asia Ⅰ型
的通用引物进行扩增，克隆测序后将测序结果利用分析软件进行比对，分析确认
了其中有 11 株 O 型口蹄疫病毒属于耿马谱系且发生了变异。石庆伟等同样利用
对 VP1 基因序列分析的方法，确定了从广东采集 5 份疑似口蹄疫病毒感染病料

中的2份为O型口蹄疫病毒感染，3份为A型口蹄疫病毒感染。整个过程比较繁琐，
结果可靠性较病毒分离试验差，但只要确保克隆后 VP1 序列的完整性，也可得
到一个较可靠的结果。

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