Page 67 - 畜牧兽医疫病防控与技术分析
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第四章 布鲁氏菌病防治技术
无内毒素活性。由于该布鲁氏菌半抗原缺乏核心糖（N-formypero-samine）位点，
且分子量小所以其免疫原性较低。有报道称在 S19 疫苗免疫的动物血清中检测
不到半抗原多糖抗体的存在，所以 NH 抗原能够区别野毒感染与疫苗免疫。由于
NH 抗原是布鲁氏菌所特有的，因此利用这种 NH 半抗原构建的检测方法可以区
别布鲁氏菌病假阳性。
6. 聚合链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）
1992 年，等依据 bcsp31 基因设计了引物 B4/B5，建立了一种特异性较高用
于鉴定布鲁氏菌属 PCR 检测方法。AMOS-PCR：20 世纪 90 年代，Bricker 等根
据在不同种型布鲁氏菌基因组中的多样性设计引物，来区分 B.melitensis 的 1、
2 和 4 生物型、B.abortus、B.ovis 和 B.suis 生物 1 型，建立了 AMOS-PCR 方法。
另外，钟旗等人也依据 IS711 在不同种型布鲁氏菌基因组中的多样性及相邻单
染色体 DNA 的差异，设计了不同的引物，进一步优化了 AMOS-PCR 方法，结
果表明 AMOS-PCR 在特异性和敏感性方面比其他布鲁氏菌病的诊断方法更高，
而且 AMOS-PCR 可区分布鲁氏菌各个种及某些生物型。实时荧光定量 PCR：
是美国 PE 公司于 20 世纪 90 年代研制的一种核酸定量检测方法，该方法结合了
PCR、DNA 杂交和光谱技术定量等优点，可以通过检测 PCR 期间荧光信号的变
化来确定靶片段的存在或不存在和含量可以通过检测 PCR 过程中荧光信号的变
化来确定目的片段是否存在和含量，敏感性均高于套式 PCR 方法。
（三）布鲁氏菌的分离培养方法
布鲁氏菌的分离培养是指从患者的血液、骨髓、脑脊液等样品中分离培养
出布鲁氏菌，是诊断布鲁氏菌感染的金标准。布鲁氏菌营养要求高，生长缓慢，
分离时间长，尤其是刚从患者或者外环境新分离的初代培养物生长更缓慢，需要
3~8d，有的甚至需要 20~30d 后才能长出肉眼可见的小菌落，而实验室保存的菌株，
常只需要 1~2d 即可生长良好。目前多采用以下几种方法进行分离培养：
1. 血培养方法
在布鲁氏菌感染早期会出现菌血症，采集患者的血液或其他体液注入血培养
瓶中，再放入自动化血培养仪中培养。Yagupsky 等对商品化血培养瓶的培养时
间进行研究，发现所有阳性标本均在 7d 之内出现阳性。在对血培养瓶种类选择
上，布鲁氏菌能在需氧瓶中生长而不能在厌氧瓶中生长。当血培养仪提示有细菌
生长时，抽取培养瓶内的液体到血平板、 巧克力平板或布氏琼脂平板上 37℃培养，
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