Page 70 - 畜牧兽医疫病防控与技术分析
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Animal Husbandry and Veterinary Disease Prevention and Control and Technical Analysis
畜牧兽医疫病防控与技术分析
信号。根据已知量的标准品绘制标准曲线，对样本进行定量分析，实现了 PCR
从定性到定量的飞跃。该检测方法易于标准化，并能将实验室工作人员感染的机
率降至最低，减少了实验室的生物安全风险，因此，该方法具有较好的应用价值。
目前，已经建立了检测布鲁氏菌基因组 16SrRNA、Bcsp31、Omp2 和 IS711 等区
域的荧光定量 PCR 方法。
（1）SYBRGreenI 荧光定量 PCR
在荧光定量 PCR 检测中，常用的 DNA 结合染料有 SYBR green I 或 EvaGreen、
SYBR Green I 等，是一种结合于所有 dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发波
长的染料。SYBR Green I 在游离状态时能发出微弱的荧光，一旦与 DNA 结合，
荧光强度则会加倍。张爱萍等利用 SYBR Green Ⅰ qPCR 技术在种属的水平上快
速鉴别布鲁氏菌，不需要进行染色和噬菌体裂解试验，缩短了检测时间。SYBR
Green Ⅰ荧光法的特异性虽不及 TaqMan 探针法，但其无需设计探针，操作简单，
试剂便宜，缺点是会检测到非特异性扩增产物，所以 SYBR Green Ⅰ qPCR 在
大样本快速检测布鲁氏菌方面比 TaqMan 探针荧光定量 PCR 更有优势，而且用
SYBR GreenⅠqPCR在属的水平上诊断布病，在布病早期筛查上更具有诊断意义。
（2）TaqMan 荧光定量 PCR
TaqMan 探针法是一种特异性高、重复性好的定量 PCR 检测技术，其主要功
能是利用 Taq 酶的 3’ → 5’ 外切核酸酶活性将探针降解，使得荧光基团和淬灭荧
光基团分离，从而产生荧光信号被系统检测到。TaqMan 探针法有两大优势，一
是高特异性，只有在探针和靶标基因之间发生特异性的水解，才会生成荧光信号；
二是多重分析，可选择不同的基因染料标记探针，在一个反应管内扩增并检测
多个不同的序列。ABDEL-HAMID 等选取了布鲁氏菌基因组中较为保守的 IS711
序列对牛血清进行了 TaqManqPCR 方法检测，得到 102cfu·mL-1 的检测下限。
SOHRABI 等建立了一种 TaqManqPCR 方法，并评价了其诊断效率，用于定量检
测人血清中的布鲁氏菌 DNA，显示了较高的敏感性，但无法区分复发和再感染。
总体来说，快速、省时的 TaqManqPCR 方法对布鲁氏菌 DNA 的检测具有较好的
诊断性能。随着 qPCR 技术的逐步简化，试剂和设备价格的降低，现在大多数国
家的临床实验室都可以使用这一强大工具。
（3）TaqManMGB 荧光定量 PCR
相比普通的 TaqMan 探针，MGB 探针采用非荧光淬灭基团，该淬灭基团分
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