Page 71 - 畜牧兽医疫病防控与技术分析

第四章 布鲁氏菌病防治技术

子本身不发光，可以大大降低本底信号的强度；其次，MGB 探针较短，设计成
功率较高，合成成本较低，有更高的序列鉴别能力，降低了错配的可能性。同
时，MGB 可以升高探针退火的温度，使反应更加稳定。高正琴等选取布鲁氏菌

基因组中较为保守的 16SrRNA 序列，设计了特异性的引物和 TaqManMGB 探
针，应用于动物体内布鲁氏菌的快速检测，该方法最低能检测到 9.3copies·μL-1
布鲁氏菌，从提取 DNA 上机检测，到获得最终结果仅用 2h，结果表明，
TaqManMGB 探针 PCR 方法在检测的灵敏度、检测速度和检出率上均优于常规

PCR，适用于传染性病原体的快速检测与鉴定。
（4）单核苷酸多态性分型
单核苷酸多态性分型（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）是一种独特
的 PCR 分析方法，可以在物种水平上表征布鲁氏菌的分离株，也可以进行多位

点测序。GOPAUL 等基于 qPCR 方法进行物种特异性单核苷酸多态性分析，针对
6 种经典布鲁氏菌和海洋哺乳动物布鲁氏菌的 SNP 位点设计了 7 对 MGB 探针，
通过对 300 多个布鲁氏菌菌株的检测，证实了其可应用性。NAN 等建立了一种
基于 SNP 的 MGBPCR 方法，能够从 18 株布鲁氏菌代表菌株、4 株布鲁氏菌疫

苗株（A19，S19，S2，M5）和 55 个布鲁氏菌临床现场株中，成功分离 104M 株。
该方法重复性好，与传统的细菌学分离与鉴定方法相比，该种 PCR 方法简便、
快捷，基于其强大的系统发育框架，该方法提供了一个良好的检测平台，便于以
后纳入新鉴定的布鲁氏菌群体，在亚种水平上实现进一步分型检测。

3. 重组酶聚合酶链反应
重组酶聚合酶链反应（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）是一种
新的 DNA 恒温扩增方法，可以在 37~42℃下 5~20min 内完成。它的分子生物学
特点是聚合酶与 DNA 重组 / 修复蛋白（包括重组酶）组合，在低温下具有活性，

通过核酸外切酶的活性分离报告基因和淬灭基团，可以实现实时 RPA 检测，例如，
在 2014 年几内亚埃博拉病毒爆发期间，使用太阳能便携式行李箱采用实时 RPA
检测埃博拉病毒，结果与实时 PCR 一致。EULER 等基于该技术定量检测了裂谷
热病毒，并通过分析证明了该技术可以替代荧光定量 PCR。RPA 检测能够在廉

价的设备中运行，虽然和传统 PCR 一样需要凝胶电泳，但它更省时，反应温度
恒定且接近自然温度，已用于野外或农村地区病原体的检测，是一种经济实用，
具有研究价值的检测方法。

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