Page 72 - 畜牧兽医疫病防控与技术分析

Animal Husbandry and Veterinary Disease Prevention and Control and Technical Analysis
畜牧兽医疫病防控与技术分析

4. 环介导等温扩增
环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是一种在
恒温条件下扩增核酸的方法。扩增可通过视觉、荧光染色、浊度和电泳检测，但

传统 LAMP 存在着扩增后污染和结果假阳性问题，而目前应用的实时 LAMP 更
特异。BHAT 等设计和开发了一种基于探针的快速、灵敏和特异的实时 LAMP 检
测方法，用于布鲁氏菌的快速检测。实时荧光 LAMP 设计引物和探针扩增羊种
布鲁氏菌 Omp28 基因后检测到的 DNA 不到 20copies·μL-1，结果表明，基于探

针的实时 LAMP 方法具有快速、经济、灵敏等特点，在布鲁氏菌的快速监测中
具有潜在的应用价值。
5. 多位点可变数目串联重复序列分析
多位点可变数目串联重复序列分析（Multiple Locus Variable Numbers Tandem

Repeat Analysis，MLVA）是一种高效的分型方法，可以测量特定位点的串联重
复数，除了 MLVA 之外，还有多位点序列分型（MLST），即细菌中多个遗传
位点的测序，是微生物种群分类中的一种有效手段。MIRKALANTARI 等采用
MLVA16 技术对布鲁氏菌进行了多样性分析，对来自伊朗 3 个地区的 54 份人和

动物布鲁氏菌标本进行分离鉴定，提取细菌基因组 DNA，利用 MLVA16 基因分
型方法，将遗传相似系数为 80% 的 54 个菌株分为 46 个基因型，目前已有 15、
16 和 21 个位点的 MLVA 方案用于布鲁氏菌的鉴别，MLVA 是监测串联重复单位
（TR）拷贝数变异的有效、快速方法，具有很高的区分度，该方法可用于疾病爆发、

流行病学研究和追溯调查。
6. 基于 CRISPR/Cas 系统的核酸快速检测方法
新兴的基于 CRISPR/Cas（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic
Repeats/CRISPR associated）介导的基因编辑技术是一个很有发展前景的研究领

域，在基础研究和生物医学应用方面具有广阔的应用价值。到目前为止，已发
现 6 种类型和 32 种的 CRISPR/Cas 系统亚型。CRISPR/Cas 系统根据 Cas 蛋白作
用机制的不同，被划分为 3 种不同的类型，其中 TypeII 型 CRISPR/Cas 系统具有
操作方便、结构简单、特异性高等特点，是应用最成熟且研究最为深入的类型。

Cas9 蛋白是最早在人类细胞中进行基因组编辑的 CRISPR 工具，但是 CRISPR/
Cas12 和 CRISPR/Cas13 系统比 CRISPR/Cas9 更准确，同时也更安全。Cas13a
为核糖核酸酶，能识别和切割 RNA，待测核酸扩增产物必需进行体外转录生成

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