Page 68 - 畜牧兽医疫病防控与技术分析

Animal Husbandry and Veterinary Disease Prevention and Control and Technical Analysis
畜牧兽医疫病防控与技术分析

挑取可疑菌落进行鉴定。
2. 双相血培养瓶培养方法
双相血培养瓶是由固相和液相组成，当液相培养液中有细菌繁殖时会在

固相生长为菌落，以减少操作步骤和检测时间。由于牛种布鲁氏菌生长需要
5%~10%CO2 环境，因此常将双相血培养瓶放置在 CO2 养箱培养，培养时间常
为 1~2 周，最长为 4 周。在 4d 后即可在固相琼脂上发现细小布鲁氏菌菌落，培
养 13~18d 才在琼脂表面长出小菌落。

3. 选择性培养基
对含有杂菌的标本如牛、羊奶等需要使用选择性培养基来抑制杂菌生长。选
择性培养基常有三种组分：基础培养基、促生长因子和抑菌剂。基础培养基常为
胰蛋白胨琼脂；促生长因子为牛 / 马的血清或脱纤维全血；抑菌剂包括使用万古

霉素、林可霉素等抑制革兰阳性菌生长，使用多粘菌素 E、萘啶酸或多粘菌素 B
等抑制革兰阴性菌生长；两性霉素、茴香霉素等抑制真菌生长。使用商品化试剂
配制的选择性平板从牛奶中可检出布鲁氏菌。为了防止细菌浓度过低而不能检出
的现象，将生牛奶经 6000~7000r/min 离心 15min，取残渣混合物涂布在选择性培

养基上，经 CO2 培养 2d 后即有可疑菌落生长。
4. 免疫磁珠分离
其原理将布鲁氏菌特异性抗体偶联在磁性微球上，形成免疫磁珠。磁珠可与
待测样品中的布鲁氏菌结合形成布鲁氏菌－抗体－磁珠复合物，在磁场的作用下，

免疫复合物与样品中的其他成分分离，磁珠上的布鲁氏菌可用于继续生化或核酸
等鉴定实验。因此免疫磁珠分离方法常与 PCR、免疫荧光等检测技术结合。该技
术与 PCR 相结合的检测限为 105CFU/ml，与量子点免疫荧光结合对布鲁氏菌的
检测限低至 103CFU/ml。这种方法可从大量的样品中收集、浓缩特定病原体，同

时减少样品中其他成分对病原体检测的干扰。
（四）布鲁氏菌的鉴定方法
1. 常规染色
布鲁氏菌在血平板上经 37℃培养 24h 后菌落形态为：针尖样大小血膜；延

长培养至 72h 为圆形、凸起、边缘整齐、不溶血的较小菌落。在革兰染色下染色
较弱，为阴性，无鞭毛、无芽胞，呈细沙状的球杆菌。柯氏染色法是鉴定布鲁氏
菌的经典染色方法之一，布鲁氏菌经柯氏染色后，布鲁氏菌呈淡红色球杆菌，而

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