Page 73 - 畜牧兽医疫病防控与技术分析

第四章 布鲁氏菌病防治技术

RNA 后才能被 Cas13a 识别和切割，增加了检测的复杂程度和所需时间。WANG
等在研究中提出了一种基于 CRISPR/Cas12a 的核酸快速检测方法，将 RPA 和
Cas12a 酶结合在一个反应系统中，可以在 30min 内完成检测，避免了封顶污染。

在蓝光下肉眼可以观察到探测信号，该方法可以在单分子水平上检测 DNA，对
支原体污染的检测准确率达到 100%，在布鲁氏菌的检测应用中显示出巨大的潜
力。LI 等将 CRISPR/Cas12a 系统引入 ELISA，结合了两种技术的优点，实现了
对有机小分子和蛋白质分子的高灵敏度检测，极大地扩展了 CRISPR-Cas12 系统

在医疗诊断中的应用。随着研究的深入，CRISPR/Cas 技术获得了广泛应用，在
以后的基因疾病模型构建以及基因检测、治疗中都有巨大的潜力。

二、布鲁氏菌病疫苗发展

（一）减毒活疫苗
1. 流产布鲁氏菌疫苗 S19 株 /A19 株
流产布鲁氏菌疫苗 S19/A19 是世界范围内首个广泛应用于牛布鲁氏菌病防
控的疫苗，是印度、阿根廷、巴西等许多国家的参考疫苗（Yang et al. 2013）。

S19 菌株于 1958 年从苏联引入中国，随后更名为 A19 菌株，一致延续使用至今
（Chengetal.2021）。S19 疫苗为流产布鲁氏菌全株疫苗，通常为冻干制剂，不需
要佐剂。以 6×1010CFU/ 头份接种于 4~6 月龄犊牛，在临床使用过程中取得不
错的效果。S19 疫苗株最初是 20 世纪初从牛奶中分离出的强毒株，在室温下传

代 1 年自然致弱获得的光滑突变体（Thomas，Bracewell，and Corbel 1981）。现
在使用的 S19 是缺失了赤藓糖醇代谢基因（Erythritol，ery）缺失的新菌株，有
703bp的核苷酸缺失，具报道与原株S19疫苗株相比可能具有较高的安全性（Crasta
et al. 2008）。但 ery 基因的缺失是否会降低菌株的毒力是存在争议的，有学者通

过转座子突变技术构建了 B.abortus 2308 ery B 基因的突变菌株，该菌株可以观
察到和 S19 一致的特性，对赤藓糖醇敏感，但是在小鼠感染模型中的验证试验
显示，它的毒性并不明显低于耐赤藓糖醇的流产 B.2308（Sangari et al. 1998）。
使用合适的剂量（不低于 6×1010CFU/ 头份）接种成年牛可以起到较高的保护

效果，预防牛群中流产早产的发生，其保护效果受多种因素的影响，例如接种月
龄、免疫途径和接种动物的健康状态等（Olsen and Stoffregen 2005； Schurig，
Sriranganathan， and Corbel2002）。实验室感染试验显示牛只接种 S19 后，用

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