Page 409 - 新编动物防疫检疫手册

温一次，连续测 96 小时，对照组 2/3 出现定型热或轻型热，试验成立。
3 兔体交互免疫试验结果判定

接种病料后体温反应 接种猪瘟兔化弱毒后体温反应 结果判定
- - 含猪瘟病毒
- + 不含猪瘟病毒
+ - 含猪瘟兔化病毒

+ + 含非猪瘟病毒热原性物质

注：“+”表示多于或等于三分之二的动物有反应。

附件 4

猪瘟病毒反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）

RT-PCR 方法通过检测病毒核酸而确定病毒存在，是一种特异、敏感、快速
的方法。在 RT-PCR 扩增的特定基因片段的基础上，进行基因序列测定，将获得

的基因信息与我国猪瘟分子流行病学数据库进行比较分析，可进一步鉴定流行毒

株的基因型，从而追踪流行毒株的传播来源或预测预报新的流行毒株。

1 材料与样品准备

1.1 材料准备：本试验所用试剂需用无 RNA 酶污染的容器分装；各种离心管
和带滤芯吸头需无 RNA 酶污染；剪刀、镊子和研钵器须经干烤灭菌。

1.2 样品制备：按1：5（W/V）比例，取待检组织和PBS液于研钵中充分研磨，4℃，

1000g 离心 15 分钟，取上清液转入无 RNA 酶污染的离心管中，备用；全血采用脱
纤抗凝备用；细胞培养物冻融 3 次备用；其它样品酌情处理。制备的样品在 2 ～ 8℃

保存不应超过 24 小时，长期保存应小分装后置 -70℃以下，避免反复冻融。

2 RNA 提取

2.1 取 1.5mL 离心管，每管加入 800μL RNA 提取液（通用 Trizol）和被检样

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