Page 429 - 新编动物防疫检疫手册
P. 429
所有样品必须置于密闭容器,并贴有详细标签,以最快捷的方式送检(如:
航空快递等)。如果在 24 小时内无法送达,则应用干冰致冷送检。
1.4 样品采集、保存及运输按照《高致病性动物病原微生物菌(毒)种或者
样本运输包装规范》(农业部公告第 503 号)执行。
2 病毒分离与鉴定
2.1 病毒分离与鉴定:按照 GB 16550 附录 A3.3、A4.1、A4.2 进行。
2.2 病原毒力测定
2.2.1 最小病毒致死量引起鸡胚死亡平均时间(MDT)测定试验
按照 GB 16550 附录 A4.3 进行;
依据 MDT 可将 NDV 分离株分为强毒力型(死亡时间≤ 60 小时);中等毒力
型(60 小时<死亡时间≤ 90 小时;温和型(死亡时间> 90 小时)。
2.2.2 脑内致病指数(ICPI)测定试验
收获接种过病毒的 SPF 鸡胚的尿囊液,测定其血凝价 >24,将含毒尿囊液用
等渗灭菌生理盐水作 10 倍稀释(切忌使用抗生素),将此稀释病毒液以 0.05mL/
羽脑内接种出壳 24 ~ 40 小时的 SPF 雏鸡 10 只,2 只同样雏鸡 0.05mL/ 羽接种稀
释液作对照(对照鸡不应发病,也不计入试验鸡)。每 24 小时观察一次,共观察
8 天。每次观察应给鸡打分,正常鸡记作 0,病鸡记作 1,死鸡记为 2(死亡鸡在
其死后的每日观察结果都记为 2)。
ICPI 值 = 每只鸡在 8 天内所有分值之和/(10 只鸡 ×8 天),如指数为 2.0,
说明所有鸡 24 小时内死亡;指数为 0.0,说明 8 天观察期内没有鸡表现临床症状。
当 ICPI 达到 0.7 或 0.7 以上者可判为新城疫中强毒感染。
2.2.3 F 蛋白裂解位点序列测定试验
NDV 糖蛋白的裂解活性是决定 NDV 病原性的基本条件,F 基因裂解位点的
核苷酸序列分析,发现在 112 ~ 117 位点处, 强毒株为 112Arg-Arg-Gln-Lys(或
419
419

