Page 138 - 肿瘤患者中西医结合护理研究

肿瘤患者中西医结合护理研究
Research on Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Nursing for Cancer Patients

（二）基因编辑在肿瘤生物治疗中面临的挑战及对策
1. 脱靶
脱靶是所有基因编辑治疗共同的阻碍，可能造成基因突变、癌 / 抑癌基因
异常，增强了基因组不稳定性，严重可造成细胞死亡或癌变。通过精准地设计

gRNA 序列，同时改造找寻具备更高特异性的 Cas 蛋白等可以极大地减少脱靶。
利用 Cas9 切口酶，通过移位配对两组 gRNA 才产生 DSB，能进一步降低脱靶概
率。在其他不造成 DSB 的新型基因编辑策略中，比如引导编辑，通过设计编辑
链 gRNA 序列、反转录引物结合序列以及非编辑链 gRNA 多重杂交限制，也可

以极大地降低乃至消除脱靶。因此针对脱靶问题，引导编辑等不形成 DSB 的策
略具有良好的应用前景。
2. 递送效率
CRISPR/Cas9 编辑系统在基础研究中多采用病毒载体递送，在临床治疗中，

由于 Cas9 载体较大，病毒递送效率有限，一直制约了基因编辑在肿瘤治疗中
的应用。随着一些 Cas9 的变体以及其他具有编辑功能 Cas 蛋白的发现，使得
分子量减小，而特异性更好。目前最小的 CasMini 已经缩小到了 Cas9 的一半大
小，单碱基编辑系统目前也能够装入腺相关病毒，这样就使得病毒荷载基因编

辑系统成为可能。然而，病毒介导的随机整合存在致癌风险，Cas9 和 gRNA 的
持续表达不仅增加脱靶概率，而且 Cas9 蛋白还可能激发机体免疫应答，因而
病毒载体不是临床应用的最优选择。电转染技术的优化进步解决了以上难题，
且不改变 CAR-T 细胞等体外制备流程和周期，因而目前几乎所有相关临床试

验均采用了这一技术。递送策略可以以质粒形式（NCT03044743），也可以以
mRNA 形式（NCT031668），而更多的是采用 Cas9 蛋白和 gRNA 的核糖核蛋
白（ribonucleoprotein，RNP）形式。RNP 电转染策略能够在保证细胞活性基础
上，获得高效编辑效率，且 Cas9 蛋白在 72h 内降解，极大地降低脱靶率，避免

了 Cas9 的免疫原性。递送后利用非同源重组末端修复的编辑效率大于 80%，而
利用同源重组修复插入的效率则在 30%~70% 之间。除了电转染技术外，一些其
他方法如膜渗透和超声等也可以实现 CRISPR/Cas9 的体外递送。非病毒载体递
送体系随着新型冠状病毒疫苗的研制成功有了飞速发展，在临床遗传性疾病治疗

中业已得到应用。然而，在过继细胞治疗中相比电转染技术并未展现出优势，相
反却增加了潜在风险，因而并未得到应用，其优势更应该体现在未来的体内编辑

128