Page 140 - 肿瘤患者中西医结合护理研究
P. 140
肿瘤患者中西医结合护理研究
Research on Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Nursing for Cancer Patients
较差，从而导致疗效不稳定。不少临床试验也选择了将 CAR 序列通过基因编辑
定点插入 TRAC 或者 PD-1 位点。定点整合除了整合 CAR 外，也可以整合其他
分子（如 PD-1 抗体、细胞因子等），可以进一步促进 T 细胞扩增及其活性发挥。
2. 非病毒载体 RNP 递送
Cas9-RNP 是有 Cas9 蛋白和 gRNA 构成的复合物，通过电转染或者纳米颗
粒等其他非病毒载体递送进入 T 细胞，仅在短短几天内表达，降低了脱靶概率，
并避免了 Cas9 持续表达对宿主免疫系统潜在激活的可能，能够完美解决病毒载
体的致瘤性、脱靶问题和免疫原性。该体系灵活易扩展，可以多条 gRNA 靶向同
一基因，或者靶向多个基因，增加线性同源臂的模板序列后还能进行定点插入。
无论是 CRISPR/Cas9 或者单碱基编辑等其他编辑策略，采用 RNP 形式递送是一
种相对更加安全有效的途径。而且在体内递送中，非病毒载体相比病毒载体，装
载容量大，更容易实现细胞特异性靶向，也具备更小的免疫原性，是递送 RNP
的优选方案。
3. 更安全高效的新型编辑系统
传统的 CRISPR/Cas9 编辑和 TALEN 编辑都要形成 DSB，在多位点编辑时
显得尤为严重，大量游离的 DNA 双链末端极大地增加了基因组不稳定性。因
此，不引起 DSB 的基因编辑方式应运而生，主要有单碱基编辑、引导编辑、
CRISPRa/CRISPRi 及表观编辑。利用单碱基编辑同时对 T 细胞中 β2M/C Ⅱ TA/
TRAC 或者 TRAC/β2M/PDCD-1 三位点编辑的 CAR-T 细胞展示了良好的编辑效
率和细胞活性。单碱基编辑的 CD7CAR-T 细胞治疗 T 细胞白血病业已在临床开
展，显示了强大的潜能，在 92.9% 细胞中均实现了对 CD7/CD52/TRAC/PD-1 共
4 个位点同时编辑敲除，且未观察到染色体易位。但单碱基编辑可能存在较为严
重的脱靶编辑，有待改进。引导编辑相对来说脱靶率极低，可以实现数十个碱基
长度的增减，而双引导编辑（TwinPE）则通过连用两个 PE 解决了编辑长度限制，
能够满足绝大多数基因编辑需求。然而对于引导编辑，其编辑效率有待提高。
CRISPRi/CRISPRa 及表观编辑通过调控转录影响基因表达，也不形成 DSB，在
多位点编辑中也具有应用前景。
此外，通过激活 CXCR2、CXCR3、CCR7 等或它们的配体表达，可以促进
T 细胞或者 NK 细胞浸润入实体瘤；而促进 IL-15、IL-7、IL-12、IL-21 等表达可
以促进 T 细胞在体内扩增和存活，增强抗肿瘤效应。但是 CRISPRa/CRISPRi 编
130
