Page 151 - 食品检验检测技术与质量安全管理研究

第六章 食品工程中的质量安全检验技术应用

（一）抗体基因的克隆

此法是最早应用于单链抗体制备的技术，也是最成熟的技术。以已被免疫的
B 细胞、融合得到的骨髓瘤细胞为材料。从一定量的 B 细胞或杂交瘤细胞中提取
总的 mRNA，反转录合成 cDNA，用 RT-PCR 技术扩增出 VL 与 VH 基因，用编
码短肽的寡核苷酸序列（Linker）将两者连接起来，克隆出所需抗体基因，重组

入原核细胞或真核细胞表达载体中进行高效表达。
（二）抗体基因组合文库技术

噬菌体抗体库技术是将噬菌体展示技术（Phagedisplay technology）应用于抗
体库技术的一大进展。它绕过了杂交瘤这一技术难关，模拟抗体多样性的机制，
噬菌体抗体库技术原料来源广泛，除杂交瘤外，还包括免疫或非免疫的动物脾
脏 B 淋巴细胞或外周血淋巴细胞，其基本原理是首先从以上试验材料中提取总

RNA，再从中纯化 mRNA，反转录成 cD-NA，通过 RT -PCR 技术进行扩容和扩
增，并随机组合到表达载体上，构建出大容量的人源性抗体库。所用载体为丝状
噬菌体载体，它继而感染大肠杆菌，经增殖并在噬菌体表面显示抗体片段 Fab 或

scFv，通过与抗原结合方式进行筛选，最终筛选出抗原特异的抗体克隆。
（三）核糖体展示
核糖体展示技术是指在体外模拟蛋白质表达过程，首先通过 RT-PCR 构建
scFv 基因，作为抗体蛋白体外表达模板，然后在体外进行转录和翻译表达，

形成核糖体 -mRNA-scFv 复合物，随后以固相化的抗原分子亲和筛选出核糖
体 -mRNA-scFv 复合物中的高亲和力 scFv。这种技术在试验中不用任何细胞，是
第一个完全在体外筛选有功能蛋白的方法。该技术克服了其他一些蛋白质筛选技

术，如该技术克服了噬菌体抗体库技术噬菌体在转化过程中，因转化效率不高而
降低库容，减少抗体库多样性的缺点，避免了宿主随细胞基因组复制过程中可能
丢失而产生的库容下降，解决了因抗体筛选条件不利于宿主细胞生存而导致抗体
丢失这一难题。由于核糖体展示技术的体外翻译、体外筛选的特点，大大缩短了

试验周期，具有省时、省力、方便、快速的特点。
（四）抗体改型技术

通过化学、物理和分子生物学的手段进行抗体修饰，对现有抗体进行结构改
造来改进其特性。如嵌合抗体、人缘化抗体、双特异性抗体和引入二硫键稳定抗
体结构形成的 dsFv 等，这些抗体通过局部结构改造降低其免疫原型、降低交叉

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