Page 153 - 食品检验检测技术与质量安全管理研究

第六章 食品工程中的质量安全检验技术应用

酯类等。

利用基因工程抗体检测食品中农药残留技术近年来发展迅速，有学者利用抗
有机磷杂交瘤细胞 6E2 分离出 VH（348bp）和 VL（321bp），用连接（Gly4Ser） 3 。
将扩增出的 VH 和 VL 基因连接成 VH-（Cly4Ser） 3 -VLscFv（750bp）， 导
入质粒 pLIP6/GN，转化 BL21 大肠杆菌，经诱导纯化获得单链抗体蛋白建立

cdELISA，分别添加同等数量 5 种有机磷农药于 5 个同等体积水中，检测结果表
明添加量农药量和检测农药量差距非常小且重复性好。有学者从小鼠皮细胞提取

mRNA，反转录扩增出大小 340bp 和 320bp 的抗体重（VH）、轻链（VL）可变
区基因片段，克隆入噬菌粒表达载体 pCANTABSE 中，构建单链抗体（scFv）文
库。经过吸附—洗脱—富集，淘洗出单链杭体，建立了甲胺磷竞争 ELISA 分析法。
该 ELISA 的线性范围为 1~500ug/mL，检出限为 3.36ug/mL。某研究者应用噬菌

体抗体库方法成功地制备了针对除草剂 Triazine 的单链抗体，间接竞争 ELISA 检
测结果表明，所获得的单链抗体对 Tri-azine 有较高的特异性和亲和力，IC 50 值可
达 15.6ng/mL，最低检测限为 5.2ng/mL。笔者认为农药作为小分子抗原，良好的

细胞是获得特异性强的基因工程抗体的重要基础，如采用扩增 VH 和 VL 的杂交
瘤细胞性能好，其杂交瘤细胞的单克隆抗体的检测水平和 HPLC-MS 仪器法相当，
另外在抗体蛋白表达时添加了分子伴侣，提高了目的抗体蛋白的可溶性表达，避
免了抗体在表达系统里由于错误折叠而失活。

（三）检测动物性食品中药物残留
兽药因其在降低发病率与死亡率、促生长、提高饲料利用率和改善产品品质
方面有显著的效果，已成为养殖业不可缺少的物质基础。动物性食品中兽药残留

是近几年来国际社会研究的热点问题之一，而且越来越受到人们的重视。因此
建立快速检测食品中兽药残留方法刻不容缓，抗体检测技术带来了一些希望。有
学者利用噬菌体展示技术得到抗氧氟沙星单链抗体并建立 ELISA 检测技术，最低
检测限 1.43ng/mL，线性检测范围 1.43~4000ng/mLDong 等瘤细胞 AC2 分离出 VH

和 VL，利用 linker 通过重叠延伸组装 VH 和 VL，组装后 scFv 导入质粒 pLIP6/
GN，转化 BL21 大肠杆菌，表达的融合蛋白通过竞争 ELISA 检测猪肉中的盐酸克
伦特罗，IC 50 值可达（0.25±0.03）ng/mL，最低检测限为（0.02±0.004）ng/mL，

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此方法与 HPLC-MS 呈线性相关（R >0.99），证明这是一种很好检测盐酸克伦特
罗的方法。有学者噬菌体抗体库技术制备的重组抗体对 13 种磺胺类药物的交叉

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