Page 264 - 新编动物防疫检疫手册
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N2 原液 N2 10 倍 N2 100 倍 N2 1000 倍
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阴性血清原液 阴性血清 10 倍 阴性血清 100 倍 阴性血清 1000 倍
2.2 将 N1、N2 标准阳性血清和阴性血清分别按原液、10 倍、100 倍稀释，并
分别加入标记好的相应试管中。
2.3 将已经确定 HA 亚型的待检鸡胚尿囊液稀释至 HA 价为 16 倍，每管均加
入 0.05ml，混匀 37℃水浴 1 小时。
2.4 每管加入的胎球蛋白溶液（50mg/ml）0.1ml，混匀，拧上盖后 37℃水浴
16-18 小时。
2.5 室温冷却后，每管加入 0.1ml 过碘酸盐混匀，室温静置 20 分钟。
2.6 每管加入 1ml 砷试剂，振荡至棕色消失乳白色出现。
2.7 每管加入 2.5ml 硫代巴比妥酸试剂，将试管置煮沸的水浴中 15 分钟，不
出现粉红色的为神经氨酸酶抑制阳性，即待检病毒的神经氨酸酶亚型与加入管中
的标准神经氨酸酶分型血清亚型一致。
附件 4
反转录 - 聚合酶链反应（RT-PCR）
反转录 - 聚合酶链反应（RT-PCR）适用于检测禽组织、分泌物、排泄物和鸡
胚尿囊液中禽流感病毒核酸。鉴于 RT-PCR 方法的敏感性和特异性，引物的选择
是最为重要的，通常引物是以已知序列为基础设计的，大量掌握国内分离株的序
列是设计特异引物的前题和基础。利用 RT-PCR 的通用引物可以检测是否有 A 型
流感病毒的存在，亚型特异性引物则可进行禽流感的分型诊断和禽流感病毒的亚
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