Page 406 - 新编动物防疫检疫手册

最后一例免疫猪被屠宰后 6 个月，经实施有效的疫情监测和血清学检测确认后，
方可重新申请非免疫无猪瘟区。

附件 1
病毒分离鉴定

采用细胞培养法分离病毒是诊断猪瘟的一种灵敏方法。通常使用对猪瘟病毒

敏感的细胞系如 PK-15 细胞等，加入 2% 扁桃体、肾脏、脾脏或淋巴结等待检组

织悬液于培养液中。37℃培养 48 ～ 72 小时后用荧光抗体染色法检测细胞培养物

中的猪瘟病毒。
步骤如下：

1. 制备抗生素浓缩液（青霉素 10000IU/mL、链霉素 10000IU/mL、卡那霉素和

制霉菌素 5000IU/mL），小瓶分装，-20℃保存。用时融化。

2. 取1～2g待检病料组织放入灭菌研钵中，剪刀剪碎，加入少量无菌生理盐水，
将其研磨匀浆；再加入Hank’S平衡盐溶液或细胞培养液，制成20%（w/v）组织悬液；

最后按 1/10 的比例加入抗生素浓缩液，混匀后室温作用 1 小时；以 1000g 离心 15

分钟，取上清液备用。

3. 用胰酶消化处于对数生长期的 PK-15 细胞单层，将所得细胞悬液以 1000g
离心 10 分钟，再用一定量 EMEM 生长液 [ 含 5% 胎牛血清（无 BVDV 抗体），

56℃灭活 30 分钟 ]、0.3％谷氨酰胺、青霉素 100I U/mL、链霉素 100I U/mL）悬浮，

使细胞浓度为 2×106/mL。

4. 9 份细胞悬液与 1 份上清液混合，接种 6 ～ 8 支含细胞玻片的莱顿氏管
（leighton's）（或其它适宜的细胞培养瓶），每管 0.2mL；同时设 3 支莱顿氏管接

种细胞悬液作阴性对照；另设 3 支莱顿氏管接种猪瘟病毒作阳性对照。

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