Page 407 - 新编动物防疫检疫手册

5. 经培养 24、48、72 小时，分别取 2 管组织上清培养物及 1 管阴性对照培养物、
1 管阳性对照培养物，取出细胞玻片，以磷酸缓冲盐水（PBS 液，pH7.2，0.01M）

或生理盐水洗涤 2 次，每次 5 分钟，用冷丙酮（分析纯）固定 10 分钟，晾干，采

用猪瘟病毒荧光抗体染色法进行检测（见附件 2）。
6. 根据细胞玻片猪瘟荧光抗体染色强度，判定病毒在细胞中的增殖情况，若

荧光较弱或为阴性，应按步骤 4 将组织上清细胞培养物进行病毒盲传。

临床发病猪或疑似病猪的全血样是猪瘟早期诊断样品。接种细胞时操作程序

如下：取 -20℃冻存全血样品置 37℃水浴融化；向 24 孔板每孔加 300 微升血样以

覆盖对数生长期的 PK-15 单层细胞；37℃吸附 2 小时。弃去接种液，用细胞培养
液洗涤细胞二次，然后加入 EMEM 维持液，37℃培养 24 至 48 小时后，采用猪瘟

病毒荧光抗体染色法检测（见附件 2）。

附件 2

猪瘟荧光抗体染色法

荧光抗体染色法快速、特异，可用于检测扁桃体等组织样品以及细胞培养中

的病毒抗原。操作程序如下：

1 样品的采集和选择
1.1 活体采样：利用扁桃体采样器（鼻捻子、开口器和采样枪）。采样器使

用前均须用 3% 氢氧化钠溶液消毒后经清水冲洗。首先固定活猪的上唇，用开口

器打开口腔，用采样枪采取扁桃体样品，用灭菌牙签挑至灭菌离心管并作标记。

1.2 其它样品：剖检时采取的病死猪脏器，如扁桃体、肾脏、脾脏、淋巴结、
肝脏和肺等，或病毒分离时待检的细胞玻片。

1.3 样品采集、包装与运输按农业部相关要求执行。

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